項(xiàng)目地點(diǎn)：江蘇

　　臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)又稱(chēng)PCR實(shí)驗(yàn)室， 是專(zhuān)門(mén)用來(lái)檢驗(yàn)艾滋病、乙型肝炎、冠狀病毒等感染性疾病的一種檢測(cè)手段。它可以通過(guò)將病毒體內(nèi)所含的基因進(jìn)行檢測(cè)，可以測(cè)出普通檢驗(yàn)難以檢測(cè)出的病毒，（測(cè)出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。）并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對(duì)樣品要求低等優(yōu)點(diǎn)，具有檢測(cè)結(jié)果可靠性、準(zhǔn)確性和安全性和權(quán)威性。

　　一般的PCR實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)區(qū)包括：試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。各區(qū)配套緩沖間及公共走廊。根據(jù)使用儀器的功能，實(shí)驗(yàn)區(qū)可適當(dāng)合并，例如使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀的，擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并?！缎滦凸跔畈《痉窝讓?shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南（第四版）》指出，新冠病毒核酸檢測(cè)方法主要是實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法，所以用于新冠病毒檢測(cè)的PCR實(shí)驗(yàn)室可以設(shè)置為“四區(qū)”或者“三區(qū)”。各區(qū)應(yīng)設(shè)置機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，并設(shè)置緩沖間。各實(shí)驗(yàn)區(qū)與緩沖間應(yīng)有一定的壓差，保證合理的空氣流向，防止交叉污染。

三區(qū)平面圖

　　本項(xiàng)目建筑面積較小，故采用三區(qū)設(shè)計(jì)，合并擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，宜采用全送全排的氣流組織形式。

　　氣流組織技術(shù)說(shuō)明：

　　1.PCR實(shí)驗(yàn)室暖通設(shè)計(jì)為全新風(fēng)全排系統(tǒng)同時(shí)也是為了保證PCR實(shí)驗(yàn)室壓差要求，初中效衛(wèi)生型新風(fēng)機(jī)組給各區(qū)送新風(fēng)，排風(fēng)機(jī)組分別進(jìn)行各區(qū)的排風(fēng)，排風(fēng)后再經(jīng)過(guò)***過(guò)濾和組合式外排廢氣處理裝置處理達(dá)標(biāo)后高空排放到大氣中，為了避免交叉污染，沒(méi)有回風(fēng)，嚴(yán)格控制送排風(fēng)口風(fēng)量大小保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。

　　2.各區(qū)送排風(fēng)機(jī)聯(lián)動(dòng)啟停，先啟動(dòng)排風(fēng)機(jī)后啟動(dòng)送風(fēng)機(jī)，停機(jī)先停送風(fēng)機(jī)后停排風(fēng)機(jī)，這樣可以完全阻斷實(shí)驗(yàn)室的污染泄露。

　　3.各實(shí)驗(yàn)區(qū)域之間具備單向的氣流組織形式，形成單向流程的保護(hù)屏障，實(shí)驗(yàn)室換氣次數(shù)宜少于每小時(shí)10次。

　　4.實(shí)驗(yàn)室氣流組織采用頂送底排，初中效送風(fēng)，***底排風(fēng)。

　　試劑準(zhǔn)備區(qū)，該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。因此，該區(qū)并不產(chǎn)生污染源，但須確保試劑免受外界污染，如該實(shí)驗(yàn)區(qū)按《標(biāo)準(zhǔn)》要求相對(duì)緩沖間設(shè)置為負(fù)壓，則緩沖間相對(duì)走廊需設(shè)置為正壓。其實(shí)，這個(gè)區(qū)域比較靈活，實(shí)驗(yàn)區(qū)相對(duì)緩沖也可以設(shè)置為常壓或正壓，但緩沖間相對(duì)走廊需設(shè)置為正壓！

試劑準(zhǔn)備區(qū)

　　標(biāo)本制備區(qū)，該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。此區(qū)取樣時(shí)病毒還未滅活，且在取樣操作時(shí)，容易造成氣溶膠擴(kuò)散。為保護(hù)人員安全，必須在生物安全柜內(nèi)操作，防止標(biāo)本氣溶膠的擴(kuò)散。此后，標(biāo)本經(jīng)過(guò)滅活處理，使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，使操作人員在對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)相對(duì)安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒(méi)有受到影響。因此，該區(qū)為主要污染區(qū)域，必須在生物安全柜內(nèi)操作！要求實(shí)驗(yàn)區(qū)相對(duì)緩沖間設(shè)置為負(fù)壓，緩沖間相對(duì)走廊需設(shè)置為負(fù)壓。

標(biāo)本制備區(qū)

　　在擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)，兩區(qū)域主要分別進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增和擴(kuò)增片段的測(cè)定。操作過(guò)程中，要防止含病毒核酸的氣溶膠通過(guò)開(kāi)門(mén)卷吸等途徑，擴(kuò)散出去對(duì)試劑與標(biāo)本造成污染，造成“假陽(yáng)性”現(xiàn)象。所以核酸擴(kuò)增室及產(chǎn)物分析區(qū)相對(duì)緩沖間應(yīng)呈相對(duì)負(fù)壓狀態(tài)，緩沖間相對(duì)走廊亦需設(shè)置為負(fù)壓。

走廊

　　為降低PCR實(shí)驗(yàn)室對(duì)實(shí)驗(yàn)室外部環(huán)境和人員帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)，內(nèi)走廊相對(duì)實(shí)驗(yàn)室外可以保持常壓或正壓，各區(qū)壓差可設(shè)置為5～10Pa。

走廊（壓差表）

　　注意事項(xiàng)：

　　1.PCR實(shí)驗(yàn)室每個(gè)區(qū)應(yīng)設(shè)置壓差表監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室壓差實(shí)時(shí)情況。

　　2.為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域壓差必須嚴(yán)格遵循單一方向流動(dòng)，即只能從試劑準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)流動(dòng)。